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發(fā)布時間：2023/8/18
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PLT VASP/P2Y12 流式檢測試劑盒
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 應(yīng)用 |
PLT VASP/P2Y12 | 7014 | 10T | 利用雙染流式細(xì)胞術(shù)，通過VASP的磷酸化作用，測定P2Y12受體活性。 |
1 簡介：
血管擴(kuò)張刺激磷蛋白（VASP）是一種重要的細(xì)胞內(nèi)血小板蛋白，基礎(chǔ)狀態(tài)下處于非磷酸化狀態(tài)。其磷酸化，是受cAMP (環(huán)磷酸腺苷) 級聯(lián)調(diào)節(jié)。前列腺素E1(PGE1)會激活級聯(lián)反應(yīng)，然而這種級聯(lián)調(diào)節(jié)通過P2Y12蛋白受體被ADP抑制。
在檢測時，VASP的磷酸化與P2Y12受體抑制效應(yīng)密切相關(guān)，而VASP的非磷酸化狀態(tài)與P2Y12 受體激活相關(guān)。
噻氯匹定和氯吡格雷對血小板受體的抑制作用是不可逆的。這種效應(yīng)通過PGE1的激活，同時ADP的加入，而使VASP保持磷酸化，而被證實。
本試劑盒利用雙色流式細(xì)胞測定術(shù)，通過VASP的磷酸化狀態(tài)的測定，從而檢測P2Y12受體活性。
2 方法：
先將全血單獨與PGE1孵育或與PGE1+ADP混合孵育。細(xì)胞滲透后，處于磷酸化狀態(tài)的VASP通過間接免疫熒光反應(yīng)特異性的被單克隆抗體標(biāo)記。使用雙色流式細(xì)胞分析測定單獨PGE1激活的和PGE1聯(lián)合ADP處理管的校準(zhǔn)平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intensities,MF1），經(jīng)減去空白對照得到校正后的MFIc，即減去陰性對照之后的平均熒光強(qiáng)度。再計算血小板反應(yīng)指數(shù)（Platelet reactivity index，PRI），即VASP磷酸化水平，評估標(biāo)本中ADP抑制VASP磷酸化的程度。
3 試劑組成
名稱 | 組分 |
Reagent 1 | 1x 60ml 瓶，稀釋液。 |
Reagent 2a | 1 x 100ul瓶，PGE1。 |
Reagent 2b | 1 x 200ul瓶，PGE1 + ADP |
Reagent 3 | 1 x 300ul 瓶，固定劑 |
Reagent 4a | 1 x 200ul 瓶，抗VASP-P 小鼠單抗+滲透劑 |
Reagent 4b | 1 x 100ul 瓶，陰性同型對照（小鼠單抗）+滲透劑 |
Reagent 5 | 1 x 300ul 瓶，染液，FITC 標(biāo)記抗小鼠IgG多抗+血小板復(fù)染試劑 （抗CD61-PE標(biāo)記）+滲透劑 |
注：提供Reagent 2a和Reagent 2b是過剩的。
4 需要自備的試劑
1）旋渦混勻器
2）計時器
3）流式細(xì)胞儀
4）移液器、槍頭
5）上樣管
當(dāng)前位置：
